Изучение центра связывания матричных РНК на рибосомах человека с помощью аффинной модификации аналогами мРНК - производными олигорибонуклеотидов, несущих кодон AUG

Номер гранта:94-04-11288
Область научного знания:биология и медицинские науки
Тип конкурса: («а» (до 2016))(«а») инициативные научные проекты
Год выполнения:1994г.
Руководитель: Карпова Г.Г.
Статус заявки:поддержана

Аннотация к отчету по результатам реализации проекта:

Изучена аффинная модификация 80S рибосом из плаценты человека аналогами мРНК - [4-(N-2-хлорэтил)-N-метиламино] бензилметил-5'-фосфамидными производными pAUGUn (n=0, 3 или 6) и 2',3'-O-[4-(N-2-хлорэтил)-N-метиламино]бензилиденовым производным AUGUUUC в составе комплексов, полученных в белок синтезирующей системе и различающихся расстоянием между кодоном AUG и зоной декодирования. Показано, что в посттранслокационных комплексах 80S рибосом с 5'-производными pAUGUn (n=3, 6) модифицируются в основном белки (S3 и S3а в сопоставимой степени). В посттранслокационном комплексе 80S рибосом с 3'-производным AUGUUUC основной мишенью модификации является белок S3а. В комплексе 80S рибосом, образованном с участием 5'-производного pAUG, модифицируется в основном 18S рРНК (внутри фрагмента 976-1164). Установлен нуклеотидный остаток 18S рРНК (A-1058), являющийся основ ной мишенью алкилирования в составе 40S инициаторных комплексов, образованных с участием 5'-производных pAUG и pAUGUUU и тройного комплекса eIF-2 * GTP * Met-tRNAf. Изучена функциональная значимость последовательностей района 980-1061 18S рРНК человека с помощью комплементарных ДНК - зондов. Показано, что последовательности 980-994, 987-1001, 1025-1039 и 1032-1046 экспонированы в составе 40S субчастиц. Два зонда (комплементарные участкам 987-1001 и 1025 - 1039 18S рРНК) будучи ковалентно присоединенными к 40S суб частицам, ингибировали трансляцию поли(U) 80S рибосомами в бесклеточной системе. Эти же олигомеры наиболее сильно ин гибировали связывание матричного тринуклеотида в комплекс pAUG * 40S * Met-tRNAf * eIF-2 * GTP. Разработан метод синтеза матричных олигорибонуклеотидов, не сущих фотоактивируемую п-азидотетрафторбензоильную группу в положении C-8 пуринового основания. Производные AUG и AUGUUU, несущие такую группу на остатке аденозина, использованы для аффинной модификации 40S субчастиц. Модификация по положению C-8 аденозина резко снижала сродство обоих аналогов мРНК к 40S субчастицам в присутствии eIF-2, GTP и Met-tRNAf, что свидетельствует о важности этого положения при связывании кодона AUG в комплекс инициации. Идентифицированы белки (S3а, S26 и субъединицы eIF-2), сшивающиеся с производными AUG и AUGUUU при облучении УФ-светом комплексов инициации.
Аннотации к заявке и отчету приведены в авторской редакции. по состоянию на 28.03.2024.

Фотогалерея:

Схема расположения мРНК на рибосоме человека
Помог ли вам материал?
0    2