Изучение взаимосвязи между фосфолипид-опосредованной и окислительно-восстановительной передачей сигнала в клетке
Номер гранта: | 12-04-92427 |
Область научного знания: | биология и медицинские науки |
Тип конкурса: | (ЕМБЛ_т)(ембл_т) конкурс рффи - европейская лаборатория молекулярной биологии |
Год выполнения: | 2012г. |
Руководитель: | Белоусов В.В. |
Статус заявки: | поддержана |
Аннотация к заявке:
Настоящий проект направлен на создание и использование флуоресцентных и фотоактивируемых молекулярных инструментов для наблюдения и направленного воздействия на сигнальные системы клетки, использующие в качестве мессенджеров активные формы кислорода и фосфорилированные формы фосфолипидов. В ходе проекта будут созданы:
- индикатор пероксида водорода HyPer, отличающийся повышенной pH-стабильностью и яркостью;
- индикаторы пероксида водорода, флуоресцирующих в синей и красной областях спектра;
- новые оптогенетические инструменты, позволяющие регулировать концентрацию пероксида водорода в клетке;
- новые оптогенетические инструменты, позволяющие регулировать концентрацию фосфорилированных фосфолипидов;
- флуоресцентный сенсор для детекции супероксид-анион радикала.
Аннотация к отчету по результатам реализации проекта:
В ходе выполнения первой части проекта были получены следующие результаты: 1. Получены первые версии генетически-кодируемого индикатора пероксида водорода HyPer, отличающихся повышенной pH-стабильностью (HyPer-GEX, HyPer-Blue) и яркостью (HyPer-Red). При этом для сенсора HyPerRed план работ был перевыполнен и, фактически, готовится публикация по данному сенсору. 2. Получены индикаторы пероксида водорода HyPer, флуоресцирующих в разных областях спектра: HyPer-Blue (синий), HyPer-GEX (зеленый), HyPer-3 (зеленый) и HyPer-RED (красный). Сенсор HyPer-3 опубликован в журнале ACS Chemical Biology совместно с европейской лабораторией. 3. Сверх запланированного, созданы первые версии красных сенсоров на базе круговых пермутантов белков mKate и FusionRED, обладающих высокой яркостью, рН-стабильностью и флуоресценцией, смещенной в дальнекрасную область. 4. Создан первый рабочий прототип сенсора на супероксид-анион радикал. Продемонстрирована работоспособность сенсора в клетках E.coli. 5. Синтезирован ген оксидазы D-аминокислот (DAAO), оптимизированный для экспрессии в клетках эукариот. При экспрессии в клетках эукариот DAAO продуцирует пероксид водорода в ответ на добавление D-аланина. 6. Синтезирован протектированный вариант D-аланина, caged D-Ala. 7. Осуществлены первые стадии синтеза мембранопроницаемой формы протектированного фосфатидилинозитол (4,5)-бисфосфата.
Аннотации к заявке и отчету приведены в авторской редакции.
по состоянию на 28.03.2024.