Исследование функциональной активности клеточных популяций гепатоцитов для создания биореактора "искусственная печень"
Номер гранта: | 13-04-97141 |
Область научного знания: | биология и медицинские науки |
Тип конкурса: | (р_поволжье_а)(р_поволжье_а) региональный конкурс поволжье |
Год выполнения: | 2013г. |
Руководитель: | Загайнова Е.В. |
Статус заявки: | поддержана |
Аннотация к заявке:
Системы поддержки печени с включением живых культур гепатоцитов – биореакторы «Искусственная печень» - являются одним из новейших подходов к лечению острой и быстро прогрессирующей хронической печеночной недостаточности, поскольку позволяют проводить не только детоксикацию, но и поддерживать метаболическую, синтетическую и регулирующую функции печени. В этих системах через полупроницаемую мембрану биореактора осуществляется перенос нутриентов, кислорода и токсинов из плазмы пациента к гепатоцитам, а продуктов метаболизма гепатоцитов - в плазму. Биореактор представляет собой трехмерную структуру, обеспечивающую культивирование гепатоцитов, поток плазмы пациента и обмен веществами между гепатоцитами и плазмой.Для оптимизации состава и условий поддержания клеточного компонента в системе биореактора «Искусственная печень», будет исследована способность культуры нормальных и патологических постнатальных гепатоцитов человека проявлять синтетическую и дезотаксикационную функции в отношении сывороток крови пациентов с прогрессирующей хронической печеночной недостаточностью на фоне цирроза, наследственных нарушений и механической желтухой с различной степенью выраженности печеночной недостаточности. Также будут изучены особенности функционирования клеточных культур гепатоцитов, выращиваемых в различных 2D и 3D пространственных моделях.
Аннотация к отчету по результатам реализации проекта:
Была исследована способность культуры нормальных постнатальных гепатоцитов человека и нормализованных гепатоцитов Chang Liver проявлять синтетическую и дезотаксикационную активности в отношении сывороток крови пациентов с прогрессирующей хронической печеночной недостаточностью на фоне цирроза и механической желтухой с различной степенью выраженности печеночной недостаточности. Были изучены особенности функционирования клеточных культур гепатоцитов, выращиваемых в различных 2D и 3D пространственных моделях. В ходе выполнения проекта решены следующие задачи: 1. Исследованы 2 типа клеточных культур гепатоцитов человека: нормальные постнатальные гепатоциты и коллекционная клеточная культура нормализованных гепатоцитов Chang Liver (в качестве контроля). 2. Были исследованы сыворотки от двух основных групп пациентов с заболеваниями печени различной этиологии. Было организовано и выполнено взятие проб, анализ биохимических показателей и предварительная обработка сывороток крови этих групп пациентов. Пациенты составили две группы, характеризующиеся: первая – нарушением синтетических и детоксикационных свойств гепатоцитов (цирроз) и вторая – нарушением детоксикационных свойств (желтуха). В сыворотке крови пациентов определялись исходные биохимические показатели, определяющие нарушения синтетической функции гепатоцитов -уровень содержания мочевины, альбумина, транстиретина; а также детоксикационной – различные фракции билирубин. 3. Проведено инкубирование описанных сывороток с клеточными культурами: с двумя культурами нормальных постнатальных гепатоцитов человека на сроке 2-го пассажа (10 дней) на временной промежуток 12 часов и с коллекционной культурой Chang Liver на различных сроках пассирования на временные промежутки 6 и 12 часов. Установлено, что биохимические составляющие сывороток крови пациентов с печеночными заболеваниями оказывают негативное влияние на культуры гепатоцитов. Определение жизнеспособности клеток проводилось стандартным методом МТТ-теста, а детекция повреждений/изменения проницаемости мембран клеток проводили с использованием ферментов-маркеров цитолиза - аспартатаминотрансферазы (АсАТ), аланинаминотрансферазы (АлАТ) и лактатдегидрогеназы (ЛДГ). 3. Оценены детоксикационные и синтетические функции гепатоцитов в зависимости от пространственной организации клеточных культур.при различных пространственных условиях инкубации.
Аннотации к заявке и отчету приведены в авторской редакции.
по состоянию на 28.03.2024.