Изучение комплексов, собранных in vitro из РНК, белков оболочки и транспортного белка1 Х-вируса картофеля

Номер гранта:06-04-48176
Область научного знания:биология и медицинские науки
Тип конкурса: («а» (до 2016))(«а») инициативные научные проекты
Год выполнения:2006г.
Руководитель: Родионова Н.П.
Статус заявки:поддержана

Аннотация к заявке:

Нитевидный Х-вирус картофеля (ХВК) является типовым членом группы потексвирусов. Для транспорта генома ХВК из клетки в клетку требуется три транспортных белка ( ТБ1,2,3), закодированных в так называемом тройном блоке генов и белок оболочки (БО). Предполагается, что в межклеточном транспорте потексвирусов участвуют либо полностью собранные вирионы, либо невирионные комплексы, содержащие вирусную РНК, БО и ТБ1.Такие комплекс, собранные in vitro, транспортируются из клетки-в- клетку в экспериментах по микроинъекции, однако их структура до сих пор не изучена. В проекте мы исследуем условия для сборки in vitro тройных комплексов (РНК ХВК-БО-ТБ1) и охарактеризуем структуру продуктов сборки с помощью атомной силовой микроскопии (АСМ), электронной и иммуноэлектронной микроскопии (ЭМ и ИМЭ, соответственно). Способность к трансляции РНК в составе комплексов будет изучена в бесклеточной белоксинтезирующей системе из зародышей пшеницы (ЗП). Мы используем генно-инженерные конструкции для получения N- и C- концевых мутантов ТБ1 и C-концевых мутантов БО для изучения роли отдельных функциональных доменов белков в формировании тройных комплексов. Мы предполагаем, что сборка растворимых тройных комплексов происходит в два этапа. Вначале, нетранслируемые не полностью одетые белком оболочки ("однохвостые") частицы формируются путем одевания белком 5'-концевой области РНК ХВК. Затем, ТБ1 молекулы связываются со спиральной белковой "головой"частиц, в результате чего они претерпевают ремодулинг и становятся транслируемыми. Транспортная форма ХВК может представлять собой не полностью собранные вирусные частицы или\и полностью собранные вирионы с ТБ1, связанным с одним концом белковой спирали.

Аннотация к отчету по результатам реализации проекта:

Предложены различные модели для объяснения природы транспортной формы потексвирусов при движении их из клетки в клетку в инфицированном растении: (1) геномная РНК движется в составе нативного вириона; или (11) транспортной формой служат невирионные рибонуклеопротеидные комплексы (РНП-к), содержащие вирусную РНК, белок оболочки (БО) и транспортный белок ТБ1. Природа этих РНП-к не изучена. Мы охарактеризовали структуру РНП-к, собранных in vitro из РНК Х- вируса картофеля (ХВК), БО и ТБ1. Показано, что единственным продуктом сборки in vitro являются РНП-к, состоящие из РНК, 5'-концевой участок которой инкапсидирован спирально упакованным БО ( частицы с " хвостом" свободной РНК и "головкой" из молекул БО), при этои ТБ1 связан с торцевыми субъединицами БО. Невирионные РНП- комплексы обнаружены не были. На основании полученных данных мы предположили, что при сборке РНП-к из РНК, БО и ТБ1 преобладает РНК-БО взаимодействие, вследствие которого образуется белковая "головка" на 5'-конце РНК (вирусные РНП, вРНП). Структуры, подобные вРНП, могут собираться и в отсутствии ТБ1. Способность к трансляции РНК в составе РНП-к была охарактеризована в бесклеточной белоксинтезирующей системе из зародышей пшеницы. Трансляция РНК в составе РНП-к ингибировалась в отсутствии ТБ1, но РНК становилась транслируемой при связывании ТБ1 с концом белковой "головки" РНП-к. Мы предполагаем, что РНК-обусловленная сборка РНП-к происходит в два этапа. Во-первых, благодаря инкапсидации 5'-концевой области РНК образуются нетранслируемые БО-РНК вРНП. Во- вторых, молекулы ТБ1 связываются с концом полярной головки вРНП, следствием чего является активирование трансляции РНК в образующихся РНП-к.
Аннотации к заявке и отчету приведены в авторской редакции. по состоянию на 29.03.2024.
Помог ли вам материал?
0    0